液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器。在液相色譜儀的使用過(guò)程中，操作人員經(jīng)常會(huì )遇到色譜峰出現分叉的情況。那么你知道色譜峰分叉是有幾個(gè)原因嗎？

　　1色譜柱污染

　　相色譜儀在開(kāi)始時(shí)沒(méi)問(wèn)題，在使用一段時(shí)間后出現色譜峰分叉的問(wèn)題，可能是由于污染引起的。這時(shí)需要對色譜柱加強沖洗，即使用比方法流動(dòng)相更強的溶劑沖洗色譜柱。

　　2保護柱失效

　　如果樣品基質(zhì)比較臟，使用一段時(shí)間之后，發(fā)現的峰分叉或拖尾等問(wèn)題，很有可能是保護柱失效造成的。一般粗略判斷標準，塔板數、壓力或分離度的改變超過(guò) 10%，就需要更換保護柱了。保護柱是消耗品，建議直接更換，不需要再生。

　　3接頭連接不正確

　　如果液相色譜儀色譜柱在使用過(guò)程中發(fā)現每個(gè)峰的峰形都出現問(wèn)題，先考察是否有連接問(wèn)題。

　　管線(xiàn)可能太長(cháng)或太短—這種情況可能導致滲漏或峰分叉/拖尾。如果管線(xiàn)太長(cháng)，密封圈位置不當，將發(fā)生滲漏。如果管線(xiàn)推出的距離不夠，將會(huì )產(chǎn)生一段死空間，形成混合腔，導致柱外體積，使峰形變壞。

　　4溶劑效應

　　在反相 LC 中， 如使用 100% 有機溶劑或 100% 強溶劑，大體積進(jìn)樣時(shí)，將使液相色譜儀色譜峰過(guò)早洗脫出色譜柱，導致峰變形。如需解決這個(gè)問(wèn)題可以對分析物進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，從而減少進(jìn)樣體積?；蛘哌M(jìn)樣溶劑改為用水稀釋?zhuān)c流動(dòng)相更為兼容，即使進(jìn)樣體積較大也不會(huì )出現峰變形。

　　較早流出的峰或靠近溶劑前沿的峰更容易出現拖尾。在液相色譜中用溶于流動(dòng)相的小體積進(jìn)樣最為理想

　　5樣品過(guò)載

　　當進(jìn)樣量超過(guò)柱子的容量，樣品峰會(huì )呈現分叉或拖尾，解決方案就是減少進(jìn)樣量。這種問(wèn)題一般在使用小體積色譜柱是表現更為明顯，所以色譜柱方法從常規250mm或150mm長(cháng)色譜柱轉化到體積較小的快速分析柱時(shí)，進(jìn)樣量要按照柱體積的減小的比例而減小。

　　6色譜柱塌陷

　　液相色譜儀由于柱塌陷引起的峰分叉，很難修復。如果流動(dòng)相pH>7或在色譜柱pH耐受范圍臨界點(diǎn)附近長(cháng)時(shí)間使用，是比較容易造成硅膠填料溶解塌陷。如果出現色譜柱塌陷，您會(huì )看到色譜圖中的每個(gè)峰峰形都會(huì )發(fā)生變化(峰拖尾、加寬或分叉)，短時(shí)間內可以反方向運行，建議直接更換色譜柱。

　　日常使用的過(guò)程中注意將溫度降低到 40 ℃以下，特別是使用高 pH 流動(dòng)相時(shí);使用高溫兼容色譜柱，如立體保護的硅膠柱、混合型柱、聚合物柱、氧化鋯柱等。使用特別適合在較高 pH 下操作的高覆蓋率或雙交聯(lián)固定相(比如，ZORBAX Extend-C18)，或使用聚合物、混合型或氧化鋯反相柱。

　　7柱前篩板部分堵塞

　　液相色譜儀長(cháng)期分析臟樣品，如果沒(méi)有保護柱或在線(xiàn)柱前過(guò)濾器，顆粒物和強吸附物很可能在柱入口篩板發(fā)生堵塞，同時(shí)伴隨著(zhù)壓力升高，解決辦法一般是色譜柱反沖。1.8um粒徑的色譜柱盡量避免反沖。由于現在使用的是高效裝柱工藝，不建議更換色譜柱入口篩板，在許多色譜柱上也不可能更換。如果更換篩板，可能影響柱效。所以最好在色譜柱前安裝在線(xiàn)過(guò)濾器和保護柱。

　　8色譜柱性能下降

　　在您使用液相色譜儀色譜柱時(shí)，會(huì )用其分析各種目標物、使用各種流動(dòng)相并分離不同的樣品基質(zhì)，經(jīng)過(guò)長(cháng)時(shí)間的使用，色譜柱會(huì )受到這些物質(zhì)的影響發(fā)生一些微妙的變化，從而引起峰分叉、拖尾或保留時(shí)間的改變。

　　在使用新色譜柱時(shí)保留其測試樣品色譜圖非常重要，在使用一段時(shí)間后進(jìn)行比較，就能發(fā)現性能上的變化。如果分離度下降導致不能進(jìn)行良好定量，這根色譜柱就應該丟棄并更換了。