一、去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒

樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì )堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會(huì )引起柱壓的升高，而且也會(huì )引起柱效下降，因為篩板的堵塞會(huì )引起液流不均，導致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析樣品前對樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾，流動(dòng)相過(guò)0.45μm濾膜。

二、流動(dòng)相的pH應在使用的范圍內
由于填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動(dòng)相超過(guò)其pH范圍將會(huì )導致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，使用壽命變短。由于流動(dòng)相的pH 控制不當而對色譜柱造成的損害，通常很難使色譜柱恢復，因此必須認真對待，嚴格控制流動(dòng)相的pH值。

三、使用保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器
樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì)，因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會(huì )產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱，堵塞篩板，導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線(xiàn)過(guò)濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此，除對樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器。
如果確認色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的，可選擇以下方式進(jìn)行補救：
1、先在色譜柱前加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。
2、先在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器，然后反向使用。

四、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑，因此緩沖鹽使用不當會(huì )使其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結，柱壓上升；同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長(cháng)色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話(huà)：使用前要過(guò)濾，使用后要沖洗。具體方法如下：

1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速沖洗60min；使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過(guò)渡流動(dòng)相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過(guò)夜。
2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前，用與初始流動(dòng)相組成相同的過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速沖洗60min，再用該過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設定應盡量平緩，以避免梯度過(guò)程中緩沖鹽析出。
注意：過(guò)渡流動(dòng)相是指有機相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同，區別只是過(guò)渡流動(dòng)相不含緩沖鹽。
3、緩沖鹽析出的補救方法：
1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過(guò)夜。

五、防止強保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時(shí)也會(huì )引起保留時(shí)間的變化，累積到一定程度時(shí)還會(huì )導致柱壓升高。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個(gè)累積效應，需要一定的時(shí)間才會(huì )體現出來(lái)，但對許多藥品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強保留物質(zhì)，因此要防止強保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。 clin-lab.com

清洗方法：
1、未使用緩沖鹽：每天分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過(guò)緩沖鹽：分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
3、補救方法：
水——乙氰——氯仿（或異丙醇）——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。
 

色譜柱日常維護注意事項：

（1）流動(dòng)相的PH值應有使用范圍內 
由于流動(dòng)相的PH 控制不當而對色譜柱造成的損害，通常很難是色譜柱恢復，因此必須認真對待，嚴格控制流動(dòng)相的PH值。
（2）去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒 
樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì )堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會(huì )引起柱壓的升高，而且也會(huì )引起柱效下降，因為篩板的堵塞會(huì )引起液流不均，導致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析樣品前對樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾，流動(dòng)相過(guò)0.45μm濾膜。 
（3）使用保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器 
樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì)，因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會(huì )產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱，堵塞篩板，導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線(xiàn)過(guò)濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大 比例，因此，除對樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器。