BHA（丁基羥基茴香醚），BHT（2,6- 二叔羥基對甲酚），TBHQ（特丁基對苯二酚）是常用的加于植物油中的酚類(lèi)抗氧化劑。

     GB/T5009.30－2003介紹了BHA、BHT的檢測方法，但這個(gè)方法真的用起來(lái)卻使人一頭霧水，不僅步驟復雜，而且效果很差，漏洞很多，堪稱(chēng)zui“使人困惑不解”的國標方法。

     該方法用石油醚溶解油樣，過(guò)硅膠－弗羅里矽土（6+4）層析柱，再用100ml二氯甲烷分五次淋洗，減壓揮干，用二硫化碳定容后開(kāi)機進(jìn)樣。儀器分析方面無(wú)懈可擊，問(wèn)題出在樣品前處理上。

     首先層析柱如何裝填就是一個(gè)問(wèn)題。按照方法，需使用者自行裝填層析柱，而手工裝填的層析柱松緊不一，很難控制質(zhì)量。填的松了怕吸附不夠，填的緊了淋洗速度奇慢，1小時(shí)也滴不出幾滴，一個(gè)樣品可能要淋洗幾天。

     洗脫時(shí)問(wèn)題也有一個(gè)大漏洞，按照方法操作，無(wú)論如何小心都會(huì )洗出一部油分，這些油分可怎么揮干呢。難道用二硫化碳只是為了連油帶抗氧化劑一起溶解后進(jìn)樣嗎？如果油分進(jìn)了柱子，可能進(jìn)不了幾個(gè)樣就污染到無(wú)法繼續的地步。而且二硫化碳揮發(fā)性*，用它定容本身就不可靠。

     如果按GB/T5009.30－1996，幾乎不可能做成實(shí)驗，且工作量大，接觸毒物多，然而既得不到準確的結果，色譜柱也會(huì )很快報廢。

     其實(shí)，植物油中的抗氧化劑檢測可以相當簡(jiǎn)單，甚至可以作為色譜初學(xué)者的入門(mén)功課。前處理方法是：稱(chēng)取1至2 克油樣，用10ml甲醇分三次萃取液（三次比例為4，3，3ml），合并萃取液上機。就這么點(diǎn)步驟，而且實(shí)際效果很好，氣相液相都可以做，同時(shí)還可用于處理TBHQ，回收率一般都在90％以上。

     因此，筆者實(shí)在不理解為什么有人放著(zhù)簡(jiǎn)單的方法不用，而偏要用如此“使人困惑不解”的方法。

     關(guān)于國標處理方法就討論到這里，下面只討論用甲醇萃取的方法。

     由于油樣的組成相當復雜，與常用的有機試劑多少有一些混溶。甲醇提取液中也會(huì )有一小部分的油分，不信的話(huà)可以加一些水，純甲醇溶液無(wú)變化，而油樣的甲醇提取液一加水立刻混濁。

     這一小部分的油分對于檢測沒(méi)有什么太大影響，但對于色譜柱污染較大。因此在不影響回收率的前題下如何排除油分的影響是該實(shí)驗的一個(gè)重點(diǎn)。

     試過(guò)用各種吸附劑、層析填料，其效果都不如一張普通的濾紙。因為濾紙能吸收油分。先把甲醇提取液放于冰箱冷凍層冰凍幾小時(shí)，再趁涼過(guò)濾。這是筆者目前發(fā)現的的驅油方法。

     BHA、BHT需配合使用才會(huì )有較好的抗氧化效果，因此有BHA就會(huì )有BHT，而TBHQ一般是單獨使用。這一點(diǎn)對我們非常有用，無(wú)論在氣相色譜還是液相色譜，BHA、BHT的分離都相當好，但是TBHQ與BHT的峰形可能會(huì )有一部分重疊，很難*分開(kāi)；因此我們可以將BHA、BHT配為一個(gè)標準，TBHQ單獨作一個(gè)標準，分別進(jìn)樣，分別定量。

     當使用氣相色譜時(shí)，如用填充柱，填料為10％SE－30 或 10％QF－1，如使用毛細管柱，可選用10m以上，0.53mm的非極性柱。

     當使用液相色譜儀時(shí)，流動(dòng)相為92:8的甲醇水溶液，紫外檢測器，檢測波長(cháng)280nm，當降低甲醇含量時(shí)，出峰時(shí)間會(huì )延遲，BHT尤其顯著(zhù)。

     為什么要用三次萃取呢。如果只針對BHA、TBHQ，一次萃取就夠了，而B(niǎo)HT在甲醇中的溶解性稍弱，因此用三次萃取增大回收率。

     如果對人身防護很看重，可以用乙醇代替甲醇，但它與油分的互溶程度更大些，提取液似乎沒(méi)有那么“干凈”。當處理某些輕質(zhì)油如代可可脂時(shí)，會(huì )有*混溶現象，這時(shí)只能用甲醇。

     如果要檢測糕點(diǎn)類(lèi)食品中的BHA、BHT、TBHQ，舊國標中有用乙醚提取出油脂，再對油脂進(jìn)行檢測的方法。這樣做費時(shí)費力，且提取回收率不高?？梢灾苯佑眉状紝κ称愤M(jìn)行提取，提取液直接進(jìn)樣。

     如果要得到比較準確的結果，應在冰箱的冷凍層存有固體的標準物質(zhì)。因為BHA、BHT、TBHQ的標準溶液雖然在一般情況下較穩定，但有時(shí)也會(huì )出現爆發(fā)式的衰減,就是高濃度的貯備液也難以幸免，尤其是TBHQ。標準物質(zhì)的準確是實(shí)驗的根本所在，因此我們要提防這一情況，如果標準峰面積較前一段實(shí)驗的峰面積明顯減小，則應引起重視。如有條件，可用紫外光度計掃描標準溶液，每次記錄吸收值。

     為實(shí)驗方便計，BHA、BHT、TBHQ的標準溶液可以按以下方法配制。先各稱(chēng)取0.025克固體標準物質(zhì)分別溶于25ml容量瓶中（溶劑：甲醇），得濃度為1.00g/L的貯備液，再各吸取1.0ml于50.0ml容量瓶中，定容，得濃度為0.02g/L的使用液。BHA、BHT的使用液可以也配在一起，TBHQ單列。這個(gè)濃度的標準峰與實(shí)際的樣品峰面積接近，適于做單點(diǎn)定量法。